Дендритные клетки иммунной системы. Активность cd4 т-клеток воспаления Что такое т клетки активированные

Для некоторых бактерий (возбудителей туберкулеза, лепры, чумы) макрофаги являются "средой обитания". Оказавшись в результате фагоцитоза в фаголизосомах, возбудители становятся защищенными как от антител, так и от цитотоксических T-лимфоцитов.

Подавляя активность лизосомальных ферментов, эти бактерии активно размножаются внутри клетки и становятся таким образом причиной острого инфекционного процесса. Неслучайно упомянутые в качестве примера заболевания относят к категории особо опасных инфекций.

В этой достаточно сложной ситуации в организме тем не менее имеются силы, препятствующие распространению возбудителей, и связаны они в первую очередь с CD4 Т-клетками воспаления.

Участие данного типа лимфоцитов в организации иммунного ответа реализуется через активацию макрофагов. Активированные макрофаги не только справляются с внутриклеточными патогенами, но и приобретают в ряде случаев дополнительные свойства, не связанные с антибактериальным действием, например, способность разрушать раковые клетки.

Для активации макрофагов требуется два сигнала.

Первый из них - интерферон-гамма (ИФ-гамма) . Это наиболее характерный цитокин, продуцируемый CD4 Т-клетками воспаления. Хелперные T-клетки не секретируют данный цитокин и не могут активировать макрофаги обычным путем.

Вторым сигналом для активации макрофагов служит поверхностный ФНО-альфа, который индуцируется к экспрессии после распознавания Т-клетками воспаления иммуногена на мембране макрофагов. Антитела к ФНО-альфа отменяют действие второго сигнала.

Цитотоксические T-клетки становятся активными сразу после распознавания антигена, реализуя потенциальную готовность молекулярного аппарата к уничтожению клеток-мишеней через процесс апоптоза или некроза. Напротив, CD4 Т-клетки воспаления после распознавания антигена на поверхности макрофагов тратят часы на синтез de novo медиаторов, активирующих макрофаги. Вновь синтезированные цитокины, собранные в микровезикулы, проникают в макрофаги в месте контакта с Т-клетками. Такой прямой путь, как и в случае с цитотоксическими Т-лимфоцитами, наиболее экономичен и функционально оправдан, поскольку не затрагивает соседние, неинфицированные клетки.

В макрофагах, активированных посредством контакта с Т-клетками воспаления и в результате секреции ИФ-гамма, инициируется ряд биохимических изменений, которые обеспечивают данным клеткам сильные антибактериальные свойства (рис.16). В условиях взаимодействия макрофагов с Т-клетками воспаления наблюдается более эффективное слияние фагосом, захвативших бактерии, с лизосомами - хранителями протеолитических ферментов, разрушающих внутриклеточные патогены. Процесс фагоцитоза сопровождается так называемым кислородным взрывом - образованием кислородных радикалов и окиси азота, обладающих бактерицидной активностью.

В условиях костимуляции ФНО-альфа и ИФ-гамма этот процесс идет гораздо активнее. Кроме того, активированные макрофаги усиливают экспрессию молекул II класса МНС и рецептора ФНО-альфа, что приводит к вовлечению дополнительных наивных Т-клеток. Весь этот комплекс событий обеспечивает достаточно прочный заслон от внутриклеточных патогенов.

Взаимодействующие с макрофагами Т-клетки воспаления не только способствуют усилению внутримакрофагальных биохимических процессов, но при этом сами активируются и выступают в роли организаторов многостороннего иммунного ответа на антиген.

Рис. 16.

Функциональная активность CD4 Т-клеток воспаления.

Основным объектом действия CD4 Т-клеток воспаления являются инфицированные макрофаги. В результате распознавания иммуногенного комплекса на макрофагах CD4 Т-клетки воспаления экспрессируют на своей поверхности фактор некроза опухолей-альфа (ФНО-альфа) и усиливают продукцию интерферона-гамма (ИФ-гамма). Совместное действие цитокинов обеспечивает более эффективное образование фаголизосом, накопление кислородных радикалов и окиси азота, обладающих бактерицидными свойствами, усиление экспрессии молекул II класса МНС, повышение продукции фактора некроза опухолей-альфа. Подобная активизация биохимических процессов в макрофагах не только способствует внутриклеточному уничтожению бактерий, но и определяет дополнительное включение Т-клеток в иммунный ответ.

Инфекционный процесс, провоцируемый воспроизводящимися патогенами, отражает борьбу двух сил - собственно возбудителя и иммунной системы хозяина. Например, возбудитель чумы Yersenia pestis обладает способностью к индуцируемому синтезу высокополимеризованного белка I , который начинает экспрессироваться на клеточной стенке при кислом значении рН. Известно, что в месте контакта возбудителя с макрофагом происходит локальное закисление. Это провоцирует синтез и экспрессию белка I. Данный белок, обладая сильными адгезивными свойствами, способствует более эффективному проникновению возбудителя внутрь клетки. Кроме того, это он помогает возбудителю избегать действия лизосомальных ферментов. Кислые условия фаголизосом поддерживают синтез этого защитного для возбудителя белка.

Макрофаги, хронически инфицированные внутриклеточными бактериями, могут терять способность активироваться Т-клетками. Массовое включение в процесс новых макрофагов происходит при высвобождении патогенов под влиянием синергического действия на инфицированные клетки ФНО-бета (лимфотоксина) и ИФ-гамма - продуктов активированных CD4 Т-клеток воспаления (рис.17).

Рис. 17

CD4 Т-клетки воспаления, как организаторы комплексного иммунного ответа.

CD4 Т-клетки воспаления при взаимодействии с макрофагами не только активируют макрофаги, но и сами активируются. Продуцируя целый набор цитокинов, они тем самым являются организаторами комплексного иммунного процесса. Клетками-мишенями регуляторного действия цитокинов являются макрофаги (1, 2, 5, 6), Т-клетки (3), прекурсоры моноцитарно- макрофагальной линии дифференцировки (4). Сокращения: ИФ-гамма - интерферон-гамма, ЛТ (ФНО-бета) - лимфотоксин (фактор некроза опухолей-бета), ИЛ-2 - интерлейкин-2, ИЛ-3 - интерлейкин-3, ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, МХФ - макрофагальный хемотаксический фактор (фактор хемотаксиса макрофагов), МИФ - макрофагальный ингибирующий фактор (фактор ингибиции макрофагов).

Это сочетание цитокинов также эффективно для гибели фибробластов - основных компонентов соединительной ткани, что обеспечивает проникновение иммунокомпетентных клеток к месту локализации инфекции. Ясно, что в условиях мобилизации иммунного ответа пул эффекторных Т-клеток должен поддерживаться на высоком уровне. Активированные макрофагами Т-клетки воспаления вовлекают дополнительные эффекторы посредством ИЛ-2 , способствующего пролиферации и дифференцировке антигенспецифических Т-клеток.

Помимо Т-эффекторов рекрутируются и сами макрофаги. Это реализуется двумя способами:

Во-первых, посредством индукции дифференцировки макрофагов в костном мозге под влиянием ИЛ-3 и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) ;

Во-вторых, вновь образованные макрофаги под влиянием лимфотоксина и макрофагального хемотаксического фактора начинают миграцию из кровяного русла в очаг локализации инфекции, где они и оседают, испытывая на себе действие макрофагингибирующего фактора, снижающего их подвижность.

Набор цитокинов, продуцируемых активированными CD4 Т-клетками воспаления после специфического распознавания патогена, обеспечивает многопрофильное развитие клеточного иммунного ответа. Таким образом, клетки рассмотренной субпопуляции выступают в качестве организаторов адекватного иммунного ответа.

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Метод исследования

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Интерпретация результатов

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

Уникальным свойством антигена, проникшего в организм, яв­ляется его способность специфически связываться с лимфоцитами и активировать их.

Согласно клонально-селекционной теории, выдвинутой в 1959 г. Бернетом, при нормальном развитии в организме возникает набор из тысяч очень небольших по объему субпопуляций лимфоцитов, имеющих на наружной мембране рецепторы лишь к одной какой-то детерминанте. Иммунный ответ оказывается специфическим в силу того, что проникший в организм антиген избирательно свя­зывается только с теми клетками, на поверхности которых имеют­ся соответствующие рецепторы. С остальными клетками этот ан­тиген не взаимодействует.

Связывание антигена индуцирует активацию лимфоцита, то есть запускает ряд процессов, приводящих к клеточному деле­нию и дифференцировке. В процессе дифференцировки лим­фоцитов происходит развитие таких эффекторных функций,

как антителообразование у В-клеток и появление цитотокси-ческой активности у части Т-клеток.

Под активацией лимфоцитов понимается достаточно слож­ный процесс перехода клетки из фазы G0 в фазу G1, вызванный взаимодействием со стимулирующим агентом (например, антиге­ном или митогеном). Термин «покоящийся лимфоцит» относится к лимфоцитам, которые находятся в фазе G0 (в этой фазе клеточ­ного цикла клетки не делятся), характеризующейся низким уров­нем метаболической активности, т. е. низкой скоростью синтеза белков и РНК при отсутствии синтеза ДНК. Реагирующие с анти­геном клетки согласно клонально-селекционной теории Бернета обычно находятся в покоящемся состоянии до получения стиму­лирующего сигнала.

При взаимодействии с антигеном в ранее «покоившихся лим­фоцитах» наряду с метаболическими изменениями, характерными для делящихся клеток, происходят процессы созревания, различ­ные в разных субпопуляциях лимфоцитов. В итоге каждая субпо­пуляция приобретает набор присущих только ей поверхностных антигенов и специфических функций.

Последовательность процессов активации лимфоцитов в об­щем виде может быть представлена следующим образом. Рецепто­ры на поверхности лимфоцита связывают стимулирующий лиганд (например, антиген) и сшиваются друг с другом, образуя неболь­шие локальные кластеры сшитых рецепторов, которые становятся наиболее эффективными в передаче активирующего сигнала.

Локальные кластеры повышают проницаемость мембраны лим­фоцита для одновалентных катионов, поступающих внутрь клет­ки, что приводит к деполяризации мембраны и локальному увели­чению концентрации Na + -, K + -АТФазы. Вследствие сшивки ре­цепторов лимфоцита активируется мембранная метилтрансфе-раза, которая катализирует образование достаточного количества монометилфосфатидилэтаноламина, повышающего текучесть мем­браны и вызывающего ее локальную перестройку. В результате этого открываются каналы, через которые ионы Са 2+ проникают (диффундируют) в лимфоцит. Вследствие такого локального уве­личения концентрации Са 2+ с внутренней стороны мембраны ак­тивируется фосфолипаза А2, катализирующая образование лизо-лецитина и арахидоновой кислоты из фосфатидилхолина. Эти ре­акции происходят в течение первых 30 мин после контакта лим­фоцита с антигеном.

Одновременно ионы Са 2+ активируют и другой цитоплазматичес-кий фермент, расщепляющий фосфатидилинозитол (по крайней мере в Т-клетках). Высвобождающаяся арахидоновая кислота при участии липоксигеназы и циклоксигеназы расщепляется с образова­нием лейкотриенов и простагландинов (одни продукты каскада ара­хидоновой кислоты регулируют синтез РНК и ДНК, другие - влия­ют на поглощение ионов Са 2+ или активность аденилатциклазы).

Лизолецитин с помощью ионов Са 2+ активирует гуанилат-циклазу, а активность аденилатциклазы уменьшается вследствие ее соседства с Ш + -К + -АТФазой, конкурирующей с ней за АТФ. Все это приводит к временному увеличению концентрации цГМФ, активирующего протеинкиназы, трансферазы жирных кислот и ферменты, увеличивающие синтез мембранных фосфолипидов. Из других протеинкиназ важное значение имеет активация проте-инкиназ, способствующих биосинтезу матричной РНК, полиами­нов и переносу метальных групп.

Поскольку транспорт глюкозы в клетку является Са-зависи-мым процессом, то поток ионов Са 2+ играет важную роль в уве­личении скорости ее транспорта, т. е. поставки исходного ма­териала для обеспечения множества энергозависимых синте­тических процессов. Повышенный транспорт аминокислот и нуклеотидов в клетку вызывает повышенное образование липо-сом, увеличение синтеза рибосомной и матричной РНК и синте­за белка в целом.

Поток ионов Са 2+ активирует сериновую эстеразу, вызываю­щую повышение клеточной подвижности благодаря изменениям в системе циклических нуклеотидов. Кроме того, сериновая эстера-за опосредованно активирует ядерную аденилатциклазу. Увеличе­ние в ядре концентрации цАМФ вызывает активацию киназ, спе­цифически фосфорилирующих кислые негистоновые белки, регу­лирующие транскрипцию и синтез ДНК. Это приводит к синтезу РНК и ДНК, начинающегося на 3-й сутки и достигающего макси­мума на 4...6-е сутки.

Среди факторов, влияющих на активацию лимфоцитов, следу­ет отметить следующие:

антигены, к которым имеются специфические рецепторы на лимфоцитах; популяцию таких лимфоцитов называют антиген-связывающими клетками;

антитела к иммуноглобулинам; сшивка поверхностных имму­ноглобулинов В-клеток с бивалентными антителами к этим имму­ноглобулинам;

интерлейкины IL-1, IL-2;

инсулин; он опосредованно, через активацию аденилатцикла­зы, активирует лимфоциты.

Ингибирующее влияние на лимфоциты оказывают следую­щие факторы:

липиды; наибольшей ингибирующей способностью из липо-протеидов обладают липопротеиды очень низкой плотности (ЛОНП), обусловливающие разобщение между потоком ионов Са 2+ в клетку и концентрацией образующихся при этом цикличес­ких нуклеотидов;

фрагменты компонентов системы комплемента СЗе, СЗс и C3d; они ингибируют пролиферацию Т-клеток и синтез антител в ответ на стимуляцию с помощью антигена.

Несмотря на то что механизмы активации лимфоцитов раз­личных популяций характеризуются определенной общностью, следует отметить и те особенности, которые наблюдаются при активации Т- и В-лимфоцитов, имеющих различные поверхност­ные маркеры, с помощью которых эти клетки взаимодействуют с внешними факторами.

Активация В-лимфоцитов. В-лимфоциты реагируют на три раз­личных типа антигенов:

2. Тимуснезависимый антиген типа 2 (например, не­которые линейные антигены, имеющие часто повторяющуюся, определенным образом организованную детерминанту, - полиме­ры D-аминокислот, поливонил-пирролидон, полисахарид пнев­мококков).

Эти антигены, длительно персистируя на поверхности спе­циализированных макрофагов краевого лимфатического узла и селезенки, специфически связываются с иммуноглобулиновыми рецепторами В-клеток. Таким образом, оба тимуснезависимых ан­тигена способны непосредственно, т. е. без участия Т-клеток, сти­мулировать В-лимфоциты и вызывать преимущественно синтез IgM. Индуцируемый ими иммунный ответ практически не сопро­вождается формированием клеток памяти.

3. Тимусзависимый антиген. Многие антигены
относятся к группе тимусзависимых. В отсутствие Т-лимфоцитов
эти антигены лишены иммуногенности - связавшись с В-клеточ-
ным рецептором, они, подобно гаптенам, не способны активиро­
вать В-клетку. Одна антигенная детерминанта тимусзависимого
антигена связывается с В-клеткой, а остальные - с Т-хелпером,
активируя его. Т-хелперы должны распознавать детерминанты но­
сителя на поверхности реагирующей В-клетки.

Антиген, связавшийся с поверхностными /gA-клетками, попа­дает в эндосомы вместе с молекулами МНС класса II, а затем возвращается на поверхность А-клетки в процессированной фор­ме. Он ассоциирован с молекулами МНС класса II и доступен для распознавания специфическими Т-хелперами. Носитель процессируется в В-клетках, запрограммированных на синтез антител к гаптену. После стимуляции Т-хелперами, распознаю­щими процессированный носитель, В-клеткам удается выпол­нить свою программу, т. е. начать производить антитела, реаги­рующие с гаптеном.

Механизм активации клеток. Связывание поверхностных рецеп­торов (IgM) В-клеток с антигеном или антителами к этим рецеп­торам вызывает совокупность последовательных реакций, анало­гичных реакциям при активации Т-клеток (поступление в В-лим-фоцит ионов Са 2+ и активация протеинкиназ) - это один меха­низм. Другой, имеющий важное значение для Т-зависимых ан-

Тигенов, - это увеличение экспрессии поверхностных молекул МНС класса II уже на самых ранних этапах активации В-клеток. С моле­кулами МНС класса II и процессированным антигеном связывается Т-хелпер, который продуцирует факторы (например, BSF-1 - от англ. B-cell stimulatory factor), обусловливающие переход В-кле­ток в фазу G-1 клеточного цикла. Как и активированная Т-клетка, стимулированный В-лимфоцит приобретает многочисленные по­верхностные рецепторы для ростовых факторов, выделяемых Т-хел-перами, в этом состоянии он готов к пролиферации - основному процессу в следующей фазе иммунного ответа.

Первыми начинают делиться Т-хелперы, на поверхности ко­торых экспрессируются высокоаффинные рецепторы к IL-2. Эти клетки пролиферируют в ответ либо на собственный IL-2, либо на IL-2, продуцируемый субпопуляцией Т-хелперов. Проли­ферацию В-клеточного клона обеспечивают Т-клеточные раство­римые факторы, в частности BSF-1 (фактор роста В-клеток, име­нуемый чаще интерлейкином-4), выделяемые активированными Т-клетками. Под влиянием других факторов (например, BCDF - от англ. B-cell differentiation factor) происходит созревание клона В-лимфобластов и ускорение их преобразования в плазматичес­кие клетки с высоким уровнем секреции IgM. Другой дифферен-цировочный фактор BCDF (также синтезируется активирован­ными Т-хелперами) переключает синтез с IgM на IgG и индуциру­ет те изменения, которые необходимы для обеспечения высокой скорости синтеза антител.

Активация Т-лимфоцитов. Для активации необходимо два сиг­нала. Роль первого сигнала может выполнять антиген (или мито-ген), связанный с молекулой МНС класса II на поверхности анти-генпрезентирующей клетки. Тройное взаимодействие между ан­тигеном, гликопротеином МНС и рецептором Т-лимфоцита гене­рирует сигнал, передаваемый через комплекс рецептора с моле­кулой CD-3 (это мембраносвязанный белковый комплекс, пред­ставляющий собой антигенспецифический Т-клеточный ре­цептор периферических Т-лимфоцитов), и одновременно обес­печивает воздействие на клетку высокой локальной концентра­ции IL-1 (второй сигнал), продуцируемого антигенпрезентирую-щей клеткой.

Активированные Т-клетки секретируют:

IL-2, стимулирующий деление клеток, имеющих рецептор к IL-2;

лимфокин BSF-1, активирующий В-клетки;

лимфокин BSF -2, стимулирующий клональную экспансию ак­тивированных В-лимфоцитов;

лимфокин BCDF -фактор дифференцировки В-клеток, спо­собствующий созреванию клеток с высокой скоростью секре­ции IgM;

лимфокин BCDF-фактор, вызывающий переключение с син­теза IgM на IgG и высокую скорость секреции последнего.

), уровня циркулирующих иммунных комплексов, основных классов иммуноглобулинов периферической крови, упор делается на расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – "натуральные киллеры"), а также оценку активированных Т-лимфоцитов (CD3 + HLA-DR + CD45 +) и активированных цитотоксических лимфоцитов (CD8 + HLA-DR + CD45 +), отвечающих за противовирусный иммунитет. Анализ вышеперечисленных популяций клеток поможет понять, адекватно ли иммунная система реагирует на вирусную инфекцию и нуждается ли пациент в иммуностимулирующей терапии.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

T-клеточные лейкозы

К каждой иммунограмме прилагается письменное заключение врача-иммунолога.



Важные замечания

Для диагностики патологий результаты этого исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов. Также следует отметить, что клиническую значимость исследования существенно повышает оценка иммунологического статуса пациента в динамике.

Литература

• Хаитов, Р. М. Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 656 с.
• Хаитов, Р. М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы: руководство для врачей / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, А. А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 352 с.
• Зуева Е. Е. Иммунная система, иммунограмма: рекомендации по назначению и применению в лечебно диагностическом процессе / Е. Е Зуева, Е. Б. Русанова, А. В. Куртова, А. П. Рыжак, М. В. Горчакова, О. В. Галкина – СПб. – Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2008. – 60 с.
• Кетлинский, С. А. Иммунология для врача / С. А. Кетлинский, Н. М. Калинина. СПб. : Гиппократ, 1998. – 156 с. Ярилин, А. А. Иммунология: учебник / А. А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.
• Хаитов, Р. М. Иммунология: атлас / Р. М. Хаитов, А. А. Ярилин, Б. В. Пинегин.М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 624 с.
• Хаитов, Р. М. Иммунология: учебник / Р.М. Хаитов. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 320 с.
• Хаитов, Р. М. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. – 2001. – N4. – С. 4-6.
• Whiteside, T. L. Role of Human Natural Killer Cells in Health and disease / T. L. Whiteside, R. B. Herberman // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 1994. – Vol. 1, №2. – P. 125-133.
• Ginadi, L. Differential expression of T-cell antigens in normal peripheral blood lymphocytes: a quantitative analysis by flow cytometry / L. Ginadi, N. Farahat, E. Matutes // J. Clin. Pathol. – 1996. – Vol. 49, № 1. – P. 539-544.
• Merser, J.C. Natural killer T-cells: rapid responders controlling immunity and disease / J.C. Merser, M.J. Ragin, A. August // International J. Biochemistry & Cell Biology. – 2005. – № 37. – P. 1337-1343.
• Никитин, В. Ю. Маркеры активации на Т-хелперах и цитотоксических лимфоцитах на различных стадиях хронического вирусного гепатита С / В. Ю. Никитин, И. А. Сухина, В. Н. Цыган [и др.] // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. – 2007. – Т. 17, № 1. – С. 65-71.
• Boettler, T. T cells with CD4 + CD25 + regulatory phenotype suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8 + T cells during chronic hepatitis C virus infection / T. Boettler, H.C. Spangenberg, C. Neumann-Haefelin // J. Virology. – 2005. – Vol. 79, N 12. – P. 7860-7867.
• Ormandy, L.A. Increased Populations of Regulatory T Cells in Peripheral Blood of Patients with Hepatocellular Carcinoma / L.A. Ormandy, T. Hillemann, H. Wedemeyer // J. Cancer Res. – 2005. – Vol. 65, N 6. – P. 2457-2464.
• Sakaguchi, S. Naturally arising FoxP3-expressing CD4 + CD25 + regulatory T cells in immunological tolerance to self- and non-self / S. Sakaguchi // Nature Immunol. – 2005. – Vol. 6, N 4. – P. 345-352.
• Romagnani, S. Regulation of the T cell response / S. Romagnani // Clin. Exp. Allergy. – 2006. – Vol. 36. – P. 1357-1366.
• Хайдуков С. В., Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения (метод многоцветного цитометрического анализа) / Хайдуков С. В., Зурочка А. В., Тотолян А. А., Черешнев В. А. // Мед. иммунология. – 2009. – Т. 11 (2-3). - С. 227-238.

2981 0

Активация Т- и В-клеток, которые экспрессируют подходящие рецепторы, завершается пролиферацией - увеличением численности (экспансией) лимфоцитарного клона - и дальнейшей дифференцировкой в эффекторные клетки; небольшое количество размножившихся клеток станет клетками памяти. Однако эффекторные функции Т- и В-клеток совершенно различны.

Активация и дифференцировка Т-клеток приводят к синтезу и выделению ряда цитокинов, воздействующих на множество различных типов клеток, или, наоборот, к развитию эффекторных клеток, которые об ладают прямым цитотоксическим действием на клетки хозяина. Напротив, активация и дифференцировка В-клеток приводят к образованию антител. В этой главе более детально описано, как активируются и исполняют свои эффекторные функции Т- и В-клетки.

Активация СD4+-Т-клеток

СD4+-Т-клет-ки, которые играют ключевую роль при ответах почти на все белковые антигены, активируются экзогенными антигенами. Вначале рассмотрим, как эти экзогенные антигены захватываются в организме антигенпрезентирующими клетками (АПК) и как впоследствии АПК взаимодействуют с CD4+-T-клетками.

Специализированные клетки, представляющие антиген Т-клеткам

Антиген может попасть в организм разными путями. В этих участках вторжения антигена находятся специализированные, или профессиональные, АПК - особенно в дыхательных путях, ЖКТ и коже, а также в лимфоидных органах и других тканях по всему телу. Наиболее важными из них являются клетки, производные миелоидного ростка костного мозга, - дендритные клетки и макрофаги. Функциями АПК являются захват антигена, его процессинг и презентация Т-клеткам, а также обеспечение костимуляторными сигналами, которые активируют наивные Т-клетки.

Дендритные клетки - это гетерогенное семейство клеток, которые можно обнаружить во многих тканях, включая тимус. Эти клетки необходимы для инициации ответа первичных, или наивных, Т-клеток, т.е. при первой активации Т-клеток чужеродным антигеном. Для эффективного функционирования дендритных клеток в качестве АПК необходимы многие свойства: они коститутивно экспрессируют высокие уровни МНС II класса (а также и I класса).

Кроме этого дендритные клетки очень подвижны, быстро перемещаются из мест, где вошли в контакт с антигеном, в лимфатические узлы , в которых смогут взаимодействовать с Т-клетками. Более того, захват и процессинг дендритными клетками антигенов, в частности микробных возбудителей, индуцируют костимуляторные сигналы, которые необходимы для активации наивных Т-клеток. Далее эти свойства описаны более детально.

Рис. 10.1. Созревание дендритной клетки после взаимодействия с бактерией в ткани

На рис. 10.1 показано, что взаимодействие антигена с дендритной клеткой в ткани определяет ее созревание, приводящее в конечном счете к тому, что несущая антиген клетка выходит из ткани в лимфатический узел, дренирующий этот участок. Антиген, показанный на рисунке, - грамотрицательная бактерия, захватывается незрелой дендритной клеткой в ткани. Бактерия взаимодействует с Toll-подобным рецептором (TLR) , который экспрессирует дендритная клетка.

Семейство TLR является паттернраспознающими молекулами, экспрессирующимися на клетках врожденной иммунной системы. Они взаимодействуют с инфекционным микроорганизмом или его компонентами: отдельными бактериальными продуктами, такими как ДНК, липопротеин и липополисахарид. Некоторые TLR взаимодействуют с различными бактериальными компонентами, тогда как другие, как предполагается, - с вирусными продуктами. Клеточная стенка грамотрицательной бактерии содержит липополисахарид и взаимодействует с TLR-4, экспрессирующимся на дендритной клетке. Это взаимодействие, связанное с захватом бактерии в клетку, активирует феномен.

Белковые компоненты бактерии процессируются до пептидов в вакуолях с кислым содержимым по пути МНС II класса. На клеточной поверхности появляется большое количество костимулирующих молекул семейства В7 (CD80/CD86), концентрация молекул МНС II класса также возрастает. Дендритная клетка тоже синтезирует высокие концентрации хемокинов и провоспалительных цитокинов, которые являются растворимыми факторами, увеличивающими или вызывающими воспалительный ответ в тканях. К этим цитокинам относят фактор некроза опухоли (TNF) а и IL-12.

Таким образом, дендритная клетка, содержащая поцессированные пептиды, покидает ткань, в которой встретилась с антигеном, и мигрирует по лимфатическим сосудам в лимфатический узел, дренирующий эту ткань. (Миграция из ткани ассоциирована с повышением экспрессии дендритными клетками хемокинового рецептора CCR7.) В Т-клеточной области лимфатического узла уже зрелая дендритная клетка, экспрессирующая высокие уровни МНС II класса и костимулирующих молекул, презентирует пептиды наивной CD4+-T-клеткe, экспрессирующей Т-клеточный рецептор, специфичный для особой комбинации МНС и пептида.

Заметим, что при отсутствии сигнала, индуцированного антигеном, незрелые дендритные клетки экспрессируют низкие концентрации костимулирующих молекул. Таким образом, антигены, не индуцирующие высокие уровни костимулирующих функций, не активируют наивные Т-клетки. Вот почему встреча дендритной клетки с собственными молекулами в нормальной ткани не приводит к активации этой клетки или Т-клеток - поскольку не индуцируется костимулирующая функция

Сходным образом для Т-клеточного и антительного ответов на многие «безвредные» антигены (например, белок куриного яйца, введенный мыши) необходимо присутствие адъюванта - такого как полный адъювант Фрейнда - который включает бактерии или бактериальные компоненты. Бактериальные компоненты адъюванта используются для активации АПК, в особенности для экспрессии костимулирующих молекул. В отсутствие этого добавочного сигнала даже чужеродный антиген может вызвать низкий ответ или вообще его не вызвать.

Миграция АПК, несущих антиген в дренирующий узел, сочетается со способностью наивных Т-клеток рециркулировать по лимфатическим сосудам в лимфатические узлы. Это увеличивает вероятность того, что единичный Т-лимфоцит, экспрессирующий подходящий TCR (по приблизительной оценке это примерно один из общей популяции, составляющей 105-106 клеток), взаимодействует с АПК, несущей антиген. В самом деле, исследования свидетельствуют, что это взаимодействие происходит в организме в течение нескольких часов после введения антигена.

Взаимодействие несущих антиген АПК и Т-клеток - особенно активированных и Т-клеток памяти - может происходить в любой ткани, зараженной или поврежденной антигеном. Каскад событий, развивающихся после того, как АПК в соединении с пептидом взаимодействует с СD4+-Т-клеткой, описывается далее.

Парные взаимодействия на поверхности АПК и CD4+-T-клетки

Пептид/МНС и TCR

Взаимодействие комплекса пептид-молекула МНС II класса, экспрессированного на АПК, и вариабельных областей Vα + Vβ TCR на Т-клетке называют первым сигналом Т-клеточной активации. Это взаимодействие необходимо, но в основном недостаточно для Т-клеточной активации, особенно для активации наивных СD4+-Т-клеток, вследствие низкой склонности к взаимодействию между TCR и комплексом пептид-МНС.

Главный комплекс гистосовместимости II класса и CD4

Взаимодействие неполиморфного участка молекулы МНС II класса (т.е. вне связывающей пептид полости) с дополнительным рецептором CD4 значительно повышает способность Т-клетки отвечать на антиген. Показано, что взаимодействие CD4-МНС II класса делает клетку в 100 раз более чувствительной к антигену, чем при его отсутствии. Рецептор CD4 играет важную роль в трансдукции Т-клеточного сигнала.

Рис. 10.2. Ключевые взаимодействия клеточных поверхностей, ведущие к активации Т-клеток и секреции цитокинов. Штриховкой указана экспрессия, повышающаяся при активации

Предполагается, что после того как комплекс пептид-МНС свяжется с TCR, CD4 приближается к TCR, и цитоплазматический хвост CD4, связанный с ферментом, участвует в Т-клеточной активации; «группирование» CD4 с TCR добавляет этот фермент в комплекс, формирующийся для передачи сигнала.

Костимулирующие пары: В7 с CD28 или CD152, CD40 с CD154

Костимулятор, или второй сигнал, усиливает и поддерживает сигналы, образовавшиеся при взаимодействии МНС - пептид - TCR. Костимуляторы необходимы для активации наивных (непримированных) Т-клеток, но менее важны для активации ранее примированных Т-клеток.

Наиболее изучены костимуляторные взаимодействия между семейством молекул, названным В7, которые экспрессируются на профессиональных АПК (таких как дендритные клетки, макрофаги и активированные В-лимфоциты), и CD28, конститутивно экспрессируемыми на Т-клетках. Больше всего известно о молекулах CD80 и CD86 семейства В7 (В7.1 и В7.2 соответственно); обе связываются с CD28. В настоящее время не ясно, обладают ли CD80 и CD86 разными функциями. Они также взаимодействуют с другой молекулой на Т-клеточной поверхности - CD152 (называемой CTLA-4), которая индуцируется при Т-клеточной активации. Молекула CD152 относится к тому же семейству молекул, что и CD28, но играет в активации Т-клеток другую роль. Костимуляторные функции других молекул семейств В7 и CD28 в настоящее время уточняются.

Взаимодействие комплекса пептид-МНС с TCR также усиливает экспрессию CD154 (лиганд CD40-CD40L) на Т-клетке. Молекула CD154 взаимодействует с CD40, постоянно экспрессируемой АПК, такими как дендритные клетки и макрофаги, а также В-клетками. Взаимодействие CD40-CD154 вызывает повышение экспрессии В7 на поверхности АПК и таким образом усиливает взаимодействие В7-CD28 между АПК и Т-клеткой. Взаимодействие CD154 на активированной Т-клетке с CD40, экспрессируемой на В-клетке, играет ключевую роль во взаимодействии Т- и В-клеток.

Молекулы адгезии: CD54 с CD11a/CD18, CD58 с CD2

Две пары адгезивных взаимодействий усиливают и стабилизируют взаимодействие АПК и Т-клетки на несколько часов, которые клеткам необходимо провести в контакте для активации Т-лимфоцита. Первое взаимодействие осуществляется между CD54 (молекула межклеточной адгезии 1; intercellular adhesion molecule 1 - ICAM-1), экспрессируемой на АПК, и интегрином CD11a/CD18 (антиген, связанный с функционированием лейкоцитов 1; leukocyte function-associated antigen 1 - LFA-1), экспрессируемым на Т-клетке.

Второе взаимодействие осуществляется между CD58 (LFA-3), экспрессируемыми на АПК, и CD2, экспрессируемыми на Т-клетке. Кроме того, предполагается, что эти адгезивные взаимодействия замедляют отделение АПК от Т-клеток при первом взаимодействии; это обеспечивает необходимое время для сканирования TCR поверхности АПК в поисках подходящего комплекса МНС II класса - пептид.

Иммунологический синапс

По нынешним представлениям при взаимодействии АПК и пептида с СD4+-Т-клеткой формируется область межклеточного контакта, называемая иммунологическим синапсом. Кроме комплекса МНС-пептид и TCR, синапс формируют пары адгезионных молекул, описанные ранее, и молекулы В7-CD28 на поверхности Т-клетки и АПК. (Входит ли взаимодействие CD40 - CD154 в синапс, еще не решено.) Кроме того, со стороны Т-клетки синапс формируют сигнальные молекулы, рекрутируемые изнутри Т-клетки, и белки цитоскелета. Похоже, что синапс необходим для поддержания обмена сигналами между клетками, который продолжается, пока АПК и T-клетка не разойдутся после контакта длительностью около 8 ч.

Синапс динамично формируется и развивается; его состав и структура меняются с течением времени после первого контакта. Например, парные молекулы адгезии CD54 (ICAM-1) и CD11а/ CD18 (LFA-1) находятся в различных зонах синапса и появляются в разное время от момента первого контакта между клетками. Кроме того, другие молекулы включаются или исключаются из синапса спустя разное время от момента первого контакта.

Данные нескольких экспериментов свидетельствуют, что после активации Т-клетки реорганизуют свою структуру, как внутренний цитоскелет, так и клеточную мембрану. В мембране Т-клеток структура липидов негомогенна; они формируют так называемые микродомены, или липидные «плоты», обогащенные холестерином и гликосфинголипидами. При активации Т-клеток эти липидные «плоты», которые до этого были распределены по мембране, подтягиваются к синапсу и приносят с собой компоненты межклеточных сигналов. Это перемещение также выталкивает из зоны контакта молекулы, не вовлеченные во взаимодействие АПК с Т-клеткой.

Межклеточные события при активации СD4+-Т-клетки

Множество недавних исследований было посвящено идентификации последовательности активационных событий внутри СD4+-Т-клетки после первоначального контакта с АПК, экспрессирующей пептид, связанный с молекулой МНС II класса. Тем не менее все стадии этого сложного и взаимосвязанного процесса полностью не понятны, хотя определенно известно, что активационный каскад распространяется в определенном порядке от поверхности клетки через цитоплазму в ядро. Также известно, что некоторые события происходят за секунды, другие - через минуты, а некоторые - спустя часы после начала взаимодействия. Основные события при активации Т-клеток описаны на рис. 10.3.

Стартовый сигнал

Связывание комплекса МНС-пептид с внеклеточными вариабельными областями (Vα+Vβ) TCR приводит к передаче сигнала через плотно связанные молекулы CD3 и ξ внутрь Т-клетки. Природа передачи через мембрану в настоящее время еще не известна: возможно, она связана с агрегацией нескольких молекул TCR в мембране клетки (подобно первым шагам активации через В-клеточный рецептор, как будет описано далее) или с конформационными изменениями трансмембранной области цепей TCR.

Рис. 10.3. Внутриклеточные события при активации Т-лимфоцита. Для простоты показаны только по одной цепи CD3, ξ и один фосфорилированный ITAM. Оранжевые полукруги обозначают фосфатные группы, добавленные к активированной молекуле

Фосфорилирование киназ, сборка и активация сигнального комплекса на клеточной мембране

После связывания лиганда с TCR одним из первых событий, определяемых в Т-клетке через несколько секунд, является активация тирозиновых киназ - ферментов, которые активируют белки путем присоединения фосфатных групп к остаткам тирозина. Тирозинкиназы связаны с цитоплазматическими участками комплекса TCR и молекул CD4. (Предполагают, что мембранный белок CD45 - тирозиновая фосфатаза, активирует эти киназы, удаляя ингибирующие фосфатные группы). Тирозинкиназа, связанная с CD3 и называется Fyn, а тирозинкиназа, связанная с CD4, - Lck. Обе принадлежат к семейству тирозиновых киназ, известных Src (произносится как «сарк»).

Когда Fyn и Lck активированы, они группируются с областями CD3 и ξ-цепями, которые содержат описанные ранее иммунорецепторные тирозинсодержащие активационные мотивы (последовательности) (ITAM), и активируют их. Эта группировка (кластер) также подтягивает CD4, находящийся в тесной ассоциации с комплексом TCR, как описано ранее. Фосфорилированные последовательности ITAM в CD3 и ξ служат местом прикрепления еще одной тирозиновой киназы ZAP-70 (она принадлежит ко второму семейству тирозиновых киназ - Syk). Эту стадию считают ключевой для активации Т-клеток, поскольку у некоторых пациентов, у которых нет ZAP-70, Т-клетки не отвечают на антиген. Так как CD3 и ξ содержат множество ITAM-последовательностей, к этому комплексу сигнальных белков присоединяется более одной молекулы ZAP-70.

Тирозинкиназа, связанная с CD4, активирует ZAP-70, когда она уже присоединена к мультимолекулярному комплексу сигнальных белков. Активированная ZAP-70 фосфорилирует множество белков внутри клетки. Среди наиболее значимых субстратов активации ZAP-70 можно назвать адаптерные молекулы. Эти белки не обладают ферментативной активностью, но содержат множество участков для связывания с другими белками. Два типа этих важных адаптерных молекул, фосфорилированных после Т-клеточной активации, - LAT и SLP-76 - показаны на рис. 10.3.

Фосфорилированные адаптеры привлекаются к клеточной мембране, увеличивая тем самым комплекс молекул для транедукции сигнала, формирующийся в иммунологическом синапсе. Таким образом, на цитоплазматической стороне Т-клеточной мембраны собирается и активируется мультимолекулярный белковый комплекс, состоящий из молекул, последовательно передающих сигнал.

Активация внутриклеточных сигнальных механизмов

Активированные адаптерные молекулы, привлеченные в иммунологический синапс, связывают ферменты и другие адаптеры, активирующие некоторые важные внутриклеточные сигнальные пути. Адаптерные молекулы связывают фосфолипазу С-γ (PLC-γ), которая после фосфорилирования ZAP-70 катализирует разрушение мембранного фосфолипида фосфотидилинозитола дифос-фата (Р1Р2).

Он разделяется на два компонента: диацилглицерол (ДАГ), который активирует ассоциированный с мембраной фермент протеин-киназу С (РКС), активирующую киназный каскад, который приводит в конечном счете к активации в цитоплазме фактора транскрипции NF-kB, и инозитолтрифосфат (IР3), увеличивающий внутриклеточную концентрацию свободного кальция, который в свою очередь активирует цитоплазматическую молекулу кальциневрина, приводя к активации фактора транскрипции NF-AT. Этот механизм является клинически значимым, поскольку иммуносупрессант циклоспорин А, используемый для предотвращения отторжения трансплантата между генетически различающимися организмами, связывается с кальциневрином и посредством этого ингибирует следующие этапы Т-клеточной активации.

Также активированные адаптерные молекулы связываются и активируют связывающие нуклеотид гуанозин белки, называемые Ras и Rac, которые в свою очередь активируют цитоплазматический каскад митогенактивируемых протеинкиназ (mitogen-activated proteinkinases - MAP), ведущий к активации фактора транскрипции АР-1.

Секреция цитокинов и пролиферация

Как показано на рис. 10.3, NF-кВ, NF-AT, АР-1 и другие активированные факторы транскрипции поступают в ядро Т-клетки и избирательно связываются с регуляторными последовательностями различных генов. В результате гены, кодирующие цитокин IL-2 и одну цепь рецептора IL-2 (IL2Ra; CD25), транскрибируются и транслируются (рис. 10.4). IL-2Ra соединяется с другими цепями рецептора, формируя высокоаффинный рецептор для IL-2 на активированной Т-клетке. В течение 24 ч клетка увеличивается в размере (становится Т-клеточным бластом) и начинает секретировать белок IL-2.

Рис. 10.4. Секреция IL-2 и его взаимодействие с высокоаффинным IL-2-рецептором, приводящее к расширению СD4+-Т-клеточного клона

Интерлейкин-2 является фактором роста Т-клеток и связывается со своим высокоаффинным рецептором на этой же самой или другой Т-клетке. Спустя примерно 48 ч синтезируется ДНК, и приблизительно еще через 24 ч активированные CD4+-T-клетки начинают пролиферировать, что ведет к увеличению их количества в этом конкретном клоне Т-клеток. Некоторые из этих активированных клеток развиваются в СD4+-клетки памяти.

Роли B7-CD28 и B7-CD152 в активации Т-клеток

Ранее подчеркивалось значение взаимодействия членов семейства В7 с CD28 для усиления и поддержки сигнала от комплекса пептид-МНС и TCR на наивной СD4+-Т-клетке. Как уже было отмечено, считается, что при отсутствии костимуляторного сигнала В7 - CD28 наивная CD4+-Т-клетка не производит IL-2 и может оставаться инактивированной (анергичной).

Как взаимодействие В7-CD28 приводит к «полной» активации Т-клеток, пока не до конца понятно, но предполагают, что при этом задействуются несколько различных механизмов. Одним из важных путей является увеличение длительности жизни некоторых иРНК, в частности иРНК IL-2, в результате активации Т-клетки через CD28. Это приводит к увеличению синтеза белка IL-2 в Т-клетках, активированных как первым, так и вторым сигналом, по сравнению с клетками, активированными только через TCR. Результаты исследований также свидетельствуют, что сигнал от CD28 увеличивает жизнеспособность Т-клеток путем индукции экспрессии белка Вс1-х, который угнетает апоптоз.

Недавно полученные данные также указывают, что взаимодействие В7-CD28 мобилизует липидные плоты внутри Т-клетки; таким способом CD28 привлекает молекулы, такие как тирозиновые киназы, которые участвуют в активации Т-клеток, находясь внутри них, в месте, где TCR контактирует с АПК. Также было показано, что взаимодействие В7-CD28 активирует киназу, называемую фосфатидилинозитол-3-киназа; активация последующих этапов этого киназного пути, вероятно, усиливает внутриклеточную передачу сигнала, проводимого через TCR.

Ранее было указано на возможность контакта лигандов на поверхности АПК из группы В7 (CD80 и CD86) с поверхностной молекулой Т-клетки, родственной CD28, CD152 (называемой CTLA-4). В отличие от CD28, которая экспрессируется на покоящихся Т-клетках, экспрессия CD152 индуцируется вследствие активации Т-клетки.

Взаимодействие В7 с CD152 передает негативный сигнал в активированную Т-клетку. Он выключает продукцию IL-2 и, таким образом, пролиферацию Т-клеток, ограничивая длительность иммунного ответа. Механизм негативного эффекта, связанного с В7-CD152, полностью не ясен; как и при взаимодействии В7-CD28. вероятно, вовлечены множество биохимических механизмов. Последние данные позволяют предположить, что CD152 действует в иммунологическом синапсе путем замещения ключевых компонентов сигнального комплекса и/или ограничения их функций.

Миграция из лимфатического узла

Спустя несколько дней после первых активационных этапов, активированные Т-клетки и клетки памяти покидают лимфатический узел и направляются в различные участки организма, в частности в те, которые подвергались воздействию или были инфицированы патогенными микроорганизмами. Миграция из лимфатического узла связана со сменой экспрессии поверхностных клеточных молекул. В основном на активированных Т-клетках снижается экспрессия CD64L (L-селектина или MEL-14), рецептора хоминга наивных Т-клеток, который позволяет клеткам войти в лимфатический узел.

Активированные Т-клетки увеличивают экспрессию других молекул клеточной поверхности, таких как интегрин CD49dCD29 (VLA-4) и CD44. Лиганды к этим молекулам экспрессируются за пределами лимфатического узла в таких тканях, как кожа, или в очагах воспаления . Результаты недавно проведенных исследований также указывают, что активированные Т-клетки отличаются от наивных по экспрессии хемокиновых рецепторов. Таким образом, вследствие этой смены экспрессии молекул хоминга и хемокиновых рецепторов активированные Т-клетки и клетки памяти выходят из лимфатического узла и направляются в ткани.

Р.Койко, Д.Саншайн, Э.Бенджамини